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離心技術(shù)的應(yīng)用

教育裝備采購網(wǎng) 2016-12-29 13:11 圍觀806次

  根據(jù)應(yīng)用目的不同,離心機有分析用和制備用兩種。分析用超速離心機僅能對小樣品(小于1ml)進行分析(如分子量的測量);制備用離心機是為提取、純化大分子組分設(shè)計的,可對10~2000ml的樣品進行分離。

  制備用離心機是應(yīng)用最廣泛的離心機,根據(jù)其性能可分為低速離心機(最大速度不超過10,000rpm)、高速離心機(High-speed centrifuge,最大轉(zhuǎn)速20,000-25,000rpm)和超速離心機(Ultracentrifuge,最大離心力可超過5000,000×g,即75,000rpm,r=8cm)。有的低速離心機的離心室有冷卻裝置;高速離心機都有冷卻裝置,以防止轉(zhuǎn)軸的溫度過高和保護生物樣品;所有超速離心機都有真空裝置,以減少離心室內(nèi)空氣和轉(zhuǎn)頭的摩擦作用。高速和超速離心機的轉(zhuǎn)頭都標有最大轉(zhuǎn)速,離心時絕對不得超過這一限度,否則會引起轉(zhuǎn)頭破裂,儀器損壞和人身傷亡。

  沉降速度離心

  沉降速度離心(Velosity Sedimentation Centrifugation)是指在離心管內(nèi)液體密度均一情況下進行的離心。最常見的方法是差速離心(Differential Centrifugation),差速離心是對含兩種以上大小不同的待分離物質(zhì)的混合液,以不同離心速度分步驟離心沉淀,使之互相分離的離心方法。例如用差速離心法進行亞細胞結(jié)構(gòu)成分的分離(表4-1)。

  

  從表4-1可知,如果以4,000×g離心15分鐘,未打破的真核細胞、細胞碎片和細胞

  可以沉淀下來;將此上清液再以15,000×g離心20分鐘可將線粒體沉淀出來。如將去除線粒體的上清液再以30,000×g離心30分鐘,溶酶體便被沉淀下來。如將去除溶酶體的上清液再以100,000×g離心3小時,核糖體和多聚核糖體可被沉淀下來。由此可知,對于沉淀不同的亞細胞組分,相對離心力和離心時間這兩個因素是不可忽視的。如果根據(jù)離心條件的不同,需要改變離心力或離心時間(必須是同一大小的轉(zhuǎn)頭)應(yīng)根據(jù)下述公式進行計算方可達到相同的分離目的。

  rpm2規(guī)定·t規(guī)定=rpm2新選·t新選

  rpm為每分鐘轉(zhuǎn)速,t為時間。

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