【基本原理】

　　蛋白質(zhì)印跡免疫分析的過(guò)程包括蛋白質(zhì)經(jīng)凝膠電泳分離后，在電場(chǎng)作用下將凝膠上的蛋白質(zhì)條帶轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，經(jīng)封閉后再用抗待檢蛋白質(zhì)的抗體作為探針與之結(jié)合，經(jīng)洗滌后，再將濾膜與二級(jí)試劑—放射性標(biāo)記的或辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶偶聯(lián)抗免疫球蛋白抗體結(jié)合，進(jìn)一步洗滌后，通過(guò)放射自顯影或原位酶反應(yīng)來(lái)確定抗原—抗體—抗抗體復(fù)合物在濾膜上的位置和豐度。

　　【器材】

　　1.轉(zhuǎn)移電泳儀

　　2.硝酸纖維素膜

　　3.濾紙

　　4.剪刀

　　5.手套

　　6.小尺

　　【試劑】

　　1.Ig G 標(biāo)準(zhǔn)品。

　　2.羊抗人辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的IgG 抗體。

　　3.轉(zhuǎn)移buffer：Tris 3.03g，Gly 14.4g，甲醇200ml，加三蒸水至1000ml 充分溶解，4℃冰箱貯存。

　　4.Tris buffer(TBS)：Tris 2.42g，NaCl 29.2g，溶于600ml 三蒸水，再用1N HCl調(diào)至pH7.5，然后補(bǔ)加三蒸水至1000ml。

　　5.漂洗液(TTBS)：TBS液500ml，加Tween20 250ul。

　　6.封閉液：5%脫脂奶粉。

　　7.抗體buffer：1.5g BSA溶于50ml TTBS。

　　8.顯色液DAB(3.3-diaminobenzidine，3.3-二氨基聯(lián)苯胺)配制：5mg DAB溶于

　　10ml 檸檬酸buffer(0.01mol/L 檸檬酸2.6ml，0.02 mol/L Na2HPO4 17.39ml)，加30% H2O2

　　10μl(臨用時(shí)現(xiàn)配)。

　　9.脫色液：甲醇250ml，冰醋酸100ml，加蒸餾水至1000ml。

　　10.氨基黑染色液(0.1%氨基黑-10B)：0.2g氨基黑-10B 溶于200ml 脫色液中，充分?jǐn)嚢枞芙?，濾紙過(guò)濾。

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