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第八屆圖書館論壇 校體購2

石蠟切片HE染色(常規(guī)HE染色)的操作步驟

教育裝備采購網(wǎng) 2017-11-27 16:17 圍觀5239次

  石蠟切片(paraffin section) 是組織學常規(guī)制片技術中最為廣泛應用的方法。石蠟切片不僅用于觀察正常細胞組織的形態(tài)結構,也是病理學和法醫(yī)學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態(tài)變化的主要方法,而且也已相當廣泛地用于其他許多學科領域的研究中。教學中,光鏡下觀察切片標本多數(shù)是石蠟切片法制備的?;畹募毎蚪M織多為無色透明,各種組織間和細胞內(nèi)各種結構之間均缺乏反差,在一般光鏡下不易清楚區(qū)別出;組織離開機體后很快就會死亡和產(chǎn)生組織腐敗,失去原有正常結構,因此,組織要經(jīng)固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細胞組織死亡,而能清晰辨認其形態(tài)結構。

  石蠟切片HE染色(常規(guī)HE染色)步驟:

  (1)二甲苯Ⅰ:5~10min;

  (2)二甲苯Ⅱ:5~10min;

  (3)無水乙醇Ⅰ:1~3min;

  (4)無水乙醇Ⅱ:1~3min;

  (5)95%乙醇Ⅰ:1~3min;

  (6)95%乙醇Ⅱ:1~3min;

  (7)80%乙醇:1min;

  (8)蒸餾水:1min;

  (9)蘇木精液染色:5~10min;

  (10)流水洗去蘇木精液:1min;

  (11)1%鹽酸-乙醇:1~3s;

  (12)稍水洗:1~2s;

  (13)返藍(用溫水或1%氨水等):5~10s;

  (14)流水沖洗:1~2min;

  (15)蒸餾水洗:1~2min;

  (16)0.5%伊紅液染色:1~3min;

  (17)蒸餾水稍洗:1~2s;

  (18)80%乙醇:1~2s;

  (19)95%乙醇Ⅰ:2~3min;

  (20)95%乙醇Ⅱ:2~3min;

  (21)無水乙醇Ⅰ:3~5min;

  (22)無水乙醇Ⅱ:3~5min;

  (23)石炭酸-二甲苯:3~5min;

  (24)二甲苯Ⅰ:3~5min;

  (25)二甲苯Ⅱ:3~5min;

  (26)二甲苯Ⅲ:3~5min;

  (27)中性樹膠封固。

  注:上述(12)和(13)項可省去,但(14)的沖水時間須延長至10~15min(細胞核顯示更清晰);(23)項可用無水乙醇代替,北方地區(qū)可省略。

  說明:石蠟切片法包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標本需要數(shù)日,但標本可以長期保存使用,為永久性顯微玻片標本。

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