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第八屆圖書館論壇 校體購2

基因組DNA提取常見問題及注意事項

教育裝備采購網(wǎng) 2018-11-07 11:44 圍觀13338次


  1.待提取樣本盡量避免反復凍融,否則會導致提取的DNA片段降解或者DNA得率嚴重下降;

  2.試劑盒中BufferEB中含有少量EDTA,可能影響下游實驗,使用時適當稀釋,如果用其他洗脫液洗脫,要確保PH>7.5,PH過低影響洗脫效率;

  3.離心柱漂洗完成后,盡可能烘干柱膜上殘留乙醇,殘留乙醇會影響洗脫效率和下游實驗效果;如果A260/230值過低,說明樣本提取過程中,漂洗不徹底,有鹽離子殘留,建議增加漂洗次數(shù);

  4.對于基因組DNA提取,A260/280值如果低于1.7說明有可能存在蛋白污染,如果值大于1.9,說明可能存在RNA污染;如果洗脫樣本時沒有使用BufferEB,而使用ddH20,比值或偏低,因為Ph值會影響吸光值,并不表示樣本純度低;

  5.對于植物樣本,樣本處理量無法統(tǒng)一確定,對于一般樣本(煙草,擬南芥等),提取量不超過100mg鮮重組織或者20mg干重組織,對于復雜樣本(水稻,玉米,榆樹等),建議初始樣本量不超過50mg鮮重或者10mg干重組織;如果需要較高的DNA量,可以采取多管濃縮的方法提取DNA;

  6.對于植物樣本,如果短時間不能低溫處理,建議使用硅膠顆粒干燥樣本,防止DNA嚴重降解;研磨處理材料過程中盡量不要過量,否則會導致DNA產(chǎn)量低;材料過量也會使樣本出現(xiàn)團塊無法裂解,導致離心柱堵塞,無法獲得高質(zhì)量DNA;

  7.植物組織在降低初始樣品量后,仍舊無法改變裂解液體粘稠,離心柱堵塞,DNA得率低,建議使用本公司BufferPL對樣本預處理1-3次后在進行提?。?/p>

  8.對于血液樣本,最好使用新鮮血液樣本或者4℃存放少于2天的樣本,否則會嚴重降低DNA產(chǎn)量;盡量避免反復凍融(不超過3-5次),每一次凍融都會降低DNA得率;

  9.對于血液樣本,如果樣本中含有血塊,說明樣本收集時未加入血液抗凝劑;建議重新收集樣本并加入EDTA,肝素,檸檬酸等抗凝劑;

  10.在使用紅細胞裂解液處理血液時,確保血液樣本已經(jīng)恢復到室溫狀態(tài);處理過程中盡可能混勻樣本,防止紅細胞裂解不完全;

  11.對于細菌樣本DNA提取,試劑盒中的溶菌酶可以裂解大部分革蘭式陽性細菌,對于特殊細菌如葡萄球菌,需要提高溶菌酶用量(建議10mg/ml溶菌酶使用量增加一倍)和溶葡萄球菌酶(Lysostaphin)共同使用;

  12.DNA濃度及純度判斷:[DNA]μg/ml=A260 x稀釋倍數(shù)x50.0 (50.0:DNA的平均吸收系數(shù));

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