高通量測(cè)序技術(shù)在腫瘤基因檢測(cè)中應(yīng)用廣泛。一方面通過(guò)基因測(cè)序可以找出癌癥的突變基因，從而迅速確定對(duì)癥藥物；另一方面，樣本類(lèi)型可以是患者的血液甚至唾液，無(wú)需傳統(tǒng)的病理切片，減少診斷過(guò)程中對(duì)患者機(jī)體的損傷。下面我們來(lái)簡(jiǎn)單介紹NGS在腫瘤樣本基因檢測(cè)應(yīng)用中的流程
。
1、樣本接收與質(zhì)量控制
血漿樣本要求：
用于ctDNA檢測(cè)的血液采集量必須在8ml以上，使用專(zhuān)業(yè)的BunnyTubeTM游離DNA樣本保存管室溫保存運(yùn)輸?shù)街行膶?shí)驗(yàn)室。
腫瘤石蠟樣本（FFPE）要求：
①整個(gè)福爾馬林固化石蠟包埋組織蠟塊；②組織大小>0.5*0.5cm，切出5-10張未染色處理過(guò)的石蠟組織，厚度2-5μm；③組織大小<0.5*0.5cm，需10-15張，制成切片或直接保存到1.5mlEP管內(nèi)腫瘤細(xì)胞含量不低于10%，壞死組織不大于70% 。玻片盒上要標(biāo)明姓名、出生日期和采集日期，常溫保存即可。
2、樣本DNA提取與破碎
針對(duì)不同樣本類(lèi)型運(yùn)用不同提取試劑盒，提取所需DNA，并通過(guò)超聲波破碎方法，使大分子片段的DNA行成一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的短序列片段。
3、文庫(kù)構(gòu)建與富集
文庫(kù)構(gòu)建：將提前準(zhǔn)備好的接頭添加到提取到的DNA片段中，然后通過(guò)DNA分選與純化試劑盒，去除不符合要求的大、小DNA片段以及多余的接頭及其他雜質(zhì)。
文庫(kù)富集：通過(guò)加入阻斷寡核苷酸--分子雜交（加入探針與目標(biāo)雜交捕獲）--吸附探針（加入磁珠從而吸附探針）--磁沉降（用磁鐵捕獲目標(biāo)片段，洗脫掉off-target片段），實(shí)現(xiàn)目標(biāo)DNA片段的選擇。
4、高通量測(cè)序
5、生信分析與報(bào)告生成
樣本數(shù)據(jù)下機(jī)后，計(jì)算中心根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的要求，對(duì)數(shù)據(jù)使用不同的分析，計(jì)算方法進(jìn)行分析。再根據(jù)生信信息分析的結(jié)果生成一份具體的報(bào)告，以便醫(yī)生解讀。
兔牙生物科技產(chǎn)品專(zhuān)為NGS開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)，廣泛應(yīng)用于腫瘤基因檢測(cè)，產(chǎn)前篩查及宏基因組測(cè)序。
