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雙光子3D組織切割成像系統(tǒng)

雙光子3D組織切割成像系統(tǒng)
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ROWIAK
TissueSurgeon
高教
德國(guó)
詳細(xì)說(shuō)明

雙光子3D組織切割成像系統(tǒng)-TissueSurgeon

  ——OCT圖像引導(dǎo)的組織和材料的非接觸精確切割,更適合切小鼠脛骨等小鼠骨骼系統(tǒng),牙齒的激光切片設(shè)備

德國(guó)LLS ROWIAK公司的TissueSurgeon是一款專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)的快速、方便、靈活的組織切片機(jī)設(shè)備。該設(shè)備使用高速高能激光系統(tǒng),能夠?qū)悠穼?shí)施如同外科手術(shù)般精準(zhǔn)的非接觸式切割。其獨(dú)特的多光子切割技術(shù)有別于目前市場(chǎng)上的任何產(chǎn)品,能夠從樣品中的任意位置開(kāi)始,直接在指定的樣品部位直接進(jìn)行切割并且不會(huì)對(duì)樣品部位造成灼傷。

雙光子3D組織切割成像系統(tǒng)-TissueSurgeon是一種多用途切片制備儀器,可以精確和無(wú)接觸地切割生物樣品、生物材料及其他材料?;陲w秒激光技術(shù),Tissuesurgeon可用于二維/三維組織和材料的切片、結(jié)構(gòu)化或溫和提取。設(shè)備克服了傳統(tǒng)機(jī)械切割的限制,對(duì)硬組織、植入組織或難以切割的材料也能輕松應(yīng)對(duì)。

  應(yīng)用領(lǐng)域

  ■  骨科方面,尤其是非脫鈣硬組織和種植體界面研究

  ■  心臟病學(xué)和心血管研究與醫(yī)學(xué),尤其是軟組織與生物材料和支架,鈣化斑塊研究

  ■  再生醫(yī)學(xué)與組織工程學(xué),尤其是植入物、支架等研究

  ■  口腔、面部和牙科醫(yī)學(xué),尤其是非脫鈣硬組織,金屬、陶瓷或聚合物植入物研究

  ■  耳鼻喉相關(guān)研究,如耳蝸、耳蝸植入物等

  ■  從小鼠到大型動(dòng)物模型的臨床前研究等

  為何選用TissueSurgeon?

  ■  樣本損失?。簬缀踹B續(xù)切片非脫鈣硬組織,無(wú)需大深度磨片,材料損失小;

  ■  難切割樣本:硬組織、軟組織、軟硬結(jié)合組織切割,甚至脆弱的樣本(如耳蝸)切割;

  ■  適合界面研究:種植體組織界面組織學(xué)(如牙釘、心血管支架、支架);

  ■  無(wú)接觸切割:無(wú)接觸激光切割組織可避免擠壓、劃傷或裂紋等;

  ■  用3D切片方法可以沿著牙釘種植體-組織界面對(duì)特定部位的樣本進(jìn)行定向、溫和的分離;

  ■  切割過(guò)程不會(huì)污染、灼傷或機(jī)械力損傷樣品,可用于生物化學(xué)分析的無(wú)污染和無(wú)接觸樣品的制備;

  ■  用于組織工程的生物材料切割(如支架、聚四氟乙烯、水凝膠);

  ■  組織,基質(zhì)和材料的3D微結(jié)構(gòu)切割;

  ■  薄切片厚度:硬組織切片10 μm;

  ■  切片速度:≥1 mm2/s;

  ■  光源類(lèi)型:紅外飛秒脈沖激光;

  ■  光學(xué)相干斷層掃描(OCT)引導(dǎo)切割,可以測(cè)量樣品尺寸和層厚,并能夠定位到病變部位,直接對(duì)病變部位進(jìn)行切割,大大提高了切割效率。

  設(shè)備參數(shù)

  TissueSurgeon產(chǎn)品升級(jí)!激光組織學(xué)的新維度:超大尺寸和可調(diào)節(jié)

可以實(shí)現(xiàn)最大6.6 cm樣本切割

SizeSlide SizeSample Size
Extra Large76 x 102 mm (3 inch x 4 inch)up to 66 x 66 mm
Double Standard76 x 52 mm (3 inch x 2 inch)up to 42 x 42 mm
Standard76 x 26 mm (3 inch x 1 inch)up to 32 x 20 mm

  應(yīng)用案例

  ■  TissueSurgeon可視化切片系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)邊看邊切

  對(duì)于病理等多種研究來(lái)書(shū),涉及到組織切片的內(nèi)容, 困難的部分莫過(guò)于尋找病變部位。 相比一個(gè)完整組織來(lái)說(shuō), 有時(shí)候研究者所關(guān)注的部分僅僅是其中變異的一小部分組織的形態(tài)而已。 但是對(duì)于傳統(tǒng)切片手段來(lái)說(shuō), 缺乏一種有效的手段來(lái)定位這個(gè)區(qū)域, 因此往往需要投入大量人力和物力去多次制樣,大量切片來(lái)尋找這個(gè)部位。 TissueSurgeon 自身集成了適合深層組織細(xì)胞成像的光學(xué)相干斷層掃描(OCT)成像功能, 幫助您直接定位到 ROI 區(qū)域。 讓切片變得可視化, 實(shí)現(xiàn)更加和可控的切片。為研究者更加迅速直觀的找到病變位置,大大提高了研究效率。

大鼠膝關(guān)節(jié)的OCT成像

大鼠膝關(guān)節(jié)的OCT 3D重構(gòu)

對(duì)含有金屬釘?shù)墓趋肋M(jìn)行成OCT成像,并引導(dǎo)切片

  ■  原位細(xì)胞3D切割成像技術(shù)基于青鳉胚胎組織的單細(xì)胞提取

  單細(xì)胞的原位組織提取一直以來(lái)都是一項(xiàng)十分困難的工作,這主要受制于組織之間連接致密難以消化,而機(jī)械力往往很難地將單個(gè)細(xì)胞與組織完整的分離。激光切割具有傳統(tǒng)切割技術(shù)所難以匹及的切割精度,是目前一種比較理想的切割手段,因此圍繞激光切割技術(shù)的相關(guān)顯微產(chǎn)品也孕育而生,并在科研領(lǐng)域中越來(lái)越受到關(guān)注。但是激光切割也有其局限性,先顯微激光切割往往要從表面開(kāi)始,無(wú)法對(duì)深層組織進(jìn)行切割;另一方面激光的光源往往采用紫外激光光源,這種類(lèi)型的光源很容易造成組織灼傷,從而影響切割下來(lái)樣品的品質(zhì),因此激光切割的應(yīng)用發(fā)展也受到了諸多限制。

  如今ROWIAK公司推出的一款全新的單細(xì)胞分離系統(tǒng)有望解決這一難題。它采用了近紅外雙光子激光切割技術(shù),在保留了激光切割精度優(yōu)勢(shì)的同時(shí),采用近紅外波長(zhǎng)的激光從而避免了激光切中對(duì)組織灼燒的問(wèn)題。因此能夠?qū)崿F(xiàn)的原位組織中的單個(gè)細(xì)胞的分離。

雙光子3D組織切割成像系統(tǒng)TissueSurgeon

發(fā)育中的青鳉胚胎

  青鳉是一種成熟的模式生物,常用于分析發(fā)育和發(fā)育過(guò)程中的細(xì)胞信號(hào)神經(jīng)生物學(xué)研究。其中使用表達(dá)熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因胚胎是一種揭示胚胎發(fā)育的良好方法。隨著基因技術(shù)的發(fā)展,研究者們?cè)絹?lái)越多地開(kāi)始關(guān)注這些標(biāo)記細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄組中的信息。雖然單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)發(fā)展迅速,但是從組織中獲得單細(xì)胞的手段卻十分有限。目前幾乎沒(méi)有手段能夠直接在組織的原位上快速獲取一個(gè)細(xì)胞,但是基于ROWIAK雙光子切割技術(shù),研究者成功地在這方面取得了一些進(jìn)展。

青鳉胚胎中感知神經(jīng)中表達(dá)mcherry的細(xì)胞成像

  研究者為了研究青鳉感覺(jué)神經(jīng)分泌細(xì)胞細(xì)胞群中特定表達(dá)m-cherry的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的內(nèi)部遺傳信息,將ROWIAK雙光子3D組織切割成像系統(tǒng)與傳統(tǒng)的顯微操作系統(tǒng)進(jìn)行結(jié)合,成功實(shí)現(xiàn)了對(duì)目標(biāo)細(xì)胞的原位分離。

  研究者先利用雙光子3D組織切割成像系統(tǒng)對(duì)青鳉胚胎中的mcherry細(xì)胞進(jìn)行了定位,然后根據(jù)其細(xì)胞群的形態(tài)設(shè)定了切割部位,隨后系統(tǒng)根據(jù)預(yù)先設(shè)定的范圍進(jìn)行切割。待切割完成后使用玻璃微管移液器將目標(biāo)的細(xì)胞部位直接取出,即獲得了目標(biāo)組織區(qū)域。這種方法能夠在不破壞樣品原位信息的情況下將感興趣的部位直接的分離,這對(duì)于揭示生物體的基因表達(dá)情況具有著深遠(yuǎn)的意義。

從青鳉胚胎中分離特定表達(dá)mcherry的細(xì)胞團(tuán)

  參考文獻(xiàn):

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  Yamamoto, T. (ed.) MEDAKA (Killifish): Biology and strains. Yamamoto, T. (ed.) Keigaku Pub. Co., Tokyo, 1975, pp.365.

  Kristin Tessmar-Raible et al.Removal of fluorescently-labeled sensory-neurosecretory cells from forebrain of transgenic Medaka embryos, focusonmicroscop. 2011.

  測(cè)試數(shù)據(jù)

染色(縮寫(xiě))

染色

圖像

描述

ABFR

阿爾新藍(lán)-核固紅

狗,唾液腺:

核仁:紅色

微酸粘蛋白:藍(lán)色

ABFR

阿爾新藍(lán)-核固紅

大鼠股骨(未脫鈣):

軟骨細(xì)胞外基質(zhì):藍(lán)色

CF

纖維蛋白-卡斯塔萊斯

兔血管:

纖維蛋白:亮紅色

血小板:灰到深藍(lán)色

膠原:亮藍(lán)色

肌肉:紅色

紅細(xì)胞:明黃色

EVG

Elastica Van Gieson染色

兔,帶支架血管:

核:褐色

結(jié)締組織:黃色

彈性纖維:紫色

肌肉:紅色

Plasma:紅色

EO

伊紅

狗爪(未脫鈣):

骨細(xì)胞,熒光

HE

蘇木精和伊紅

帶支架兔冠狀動(dòng)脈:

核:藍(lán)色

其余組織:紅色

LL

Levai-Laczko染色

羊骨連接處(未脫鈣):

核:violett-blue

細(xì)胞質(zhì):藍(lán)色

紅細(xì)胞:深藍(lán)色

軟骨基質(zhì):亮藍(lán)色

骨基質(zhì):鮮紅色

類(lèi)骨質(zhì):紫色

纖維:藍(lán)紫色

McN

McNeil Tetra Chrome染色

狗脛骨(未脫鈣):

骨:粉紅色/紅色

細(xì)胞和細(xì)胞核:藍(lán)色

軟骨:紫色

結(jié)締組織:紅/粉紅色

MG

Masson Goldner Trichchrome with 

light green and anilin blue染色

小鼠股骨(未脫鈣),生長(zhǎng)板:

骨:綠色

類(lèi)骨質(zhì):橙色

軟骨:粉紅色

肌肉纖維:紅色

膠原蛋白:綠色

細(xì)胞質(zhì):粉紅色

核:棕色

MP

Movat Pentachrome染色

狗爪(未脫鈣):

核仁:藍(lán)-黑色

肌肉組織:紅色

基質(zhì):藍(lán)色

膠原:蛋白:黃色

軟骨::藍(lán)-綠色

彈性纖維:黑色

骨:黃-紅色

Nissl

尼氏染色法

人腦:

核和尼氏體:

紅紫羅蘭色/紫羅蘭色

細(xì)胞質(zhì)和其他組織:

亮藍(lán)色到亮紫羅蘭色

Sirius

天狼星紅

人主動(dòng)脈斑塊:

纖維組織:紅色

SRS

Sanderson Rapid Stain染色

鼠下頜骨(未脫鈣):

骨和細(xì)胞核:藍(lán)色

SRS   + VG

Sanderson Rapid Stain + van Gieson染色

大鼠股骨(未脫鈣),生長(zhǎng)板:

骨:粉紅色

骨髓細(xì)胞:藍(lán)色到紫色

生長(zhǎng)板軟骨:紅色

VEL

Verhoeffs Elastica染色

兔,帶支架血管:

彈性纖維:黑色

其余組織:紅色

  發(fā)表文章

  1. Nolte, P.; Brettmacher M.; Gr?ger, C. J.; Gellhaus, T.; Svetlove A.; Schilling, A. F.; Alves, A.; Ru?mann, C.; Dullin, C.; (2023) Spatial correlation of 2D hardtissue histology with 3D microCT scans through 3D printed phantoms Sci Rep 13, 18479 

  2.  Kevin Janot, Grégoire Boulouis, Géraud Forestier, Fouzi Bala, Jonathan Cortese, Zoltán Szatmáry, Sylvia M. Bardet, Maxime Baudouin, Marie-Laure Perrin, Jérémy Mounier, Claude Couquet, Catherine Yardin, Guillaume Segonds, Nicolas Dubois, Alexandra Martinez, Pierre-Louis Lesage, Yong-Hong Ding, Ramanathan Kadirvel , Daying Dai, Charbel Mounayer, Faraj Terro, Aymeric Rouchaud. (2023) WEB shape modifications: “angiography–histopathology correlations in rabbits” J NeuroIntervent Surg 2023;0:1–7. 

  3. Géraud FORESTIER, Jonathan CORTESE, Sylvia M. BARDET, Maxime BAUDOUIN, Kévin JANOT, Voahirana RATSIMBAZAFY, Marie-Laure PERRIN, Jérémy MOUNIER, Claude COUQUET, Catherine YARDIN, Yan LARRAGNEGUY, Flavie SOUHAUT, Romain CHAUVET, Alexis BELGACEM, Sonia BRISCHOUX, Julien MAGNE, Charbel MOUNAYER, Faraj TERRO, Aymeric ROUCHAUD. (2023) “Comparison of Arterial Wall Integration of different Flow Diverters in rabbits” the CICAFLOW study Journal of Neuroradiology, In press. 

  4. Donath, S?ren, Leon Angerstein, Lara Gentemann, Dominik Müller, Anna E. Seidler, Christian Jesinghaus, André Bleich, Alexander Heisterkamp, Manuela Buettner, and Stefan Kalies. (2022). “Investigation of Colonic Regeneration via Precise Damage Application Using Femtosecond Laser-Based Nanosurgery” Cells 11, no. 7: 1143. https://doi.org/10.3390/cells11071143 

  5. Müller, Dominik, S?ren Donath, Emanuel G. Brückner, Santoshi Biswanath Devadas, Fiene Daniel, Lara Gentemann, Robert Zweigerdt, Alexander Heisterkamp, and Stefan M.K. Kalies. (2021). “How Localized Z-Disc Damage Affects Force Generation and Gene Expression in Cardiomyocytes” Bioengineering 8, no. 12: 213. https://doi.org/10.3390/bioengineering8120213 

  6. Müller D, Klamt T, Gentemann L, Heisterkamp A, Kalies SMK (2021) Evaluation of laser induced sarcomere micro-damage: Role of damage extent and location in cardiomyocytes. PLoS ONE 16(6): e0252346. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0252346

  7. Bouyer M; Garot C; Machillot P; Vollaire J; Fitzpatrick V; Morand S; Boutonnat J; Josserand V; Bettega G; Picart C (2021) 3D-printed scaffold combined to 2D osteoinductive coatings to repair a critical-size mandibular bone defect Materials Today Bio 11 100113 

  8. Verhaegen C, Kautbally S, Zapareto D C, Brusa D, Courtoy G, Aydin S, Bouzin C, Oury C, Bertrand L, Jacques P J, Beauloye C, Horman S, Kefer J (2020) Early thrombogenicity of coronary stents: comparison of bioresorbable polymer sirolimus-eluting and bare metal stents in an aortic rat model. Am J Cardiovasc Dis. 10(2):72-83 

  9. Zeller-Plumhoff B, Malicha C, Krüger D, Campbella G, Wiesea B, Galli S, Wennerberg A, Willumeit-R?mer R, Wieland F (2020) Analysis of the bone ultrastructure around biodegradable Mg–x Gd implants using small angle X-ray scattering and X-ray diffraction Acta Biomaterialia 101 637–645

  10. Rousselle S D , Wicks J R, Tabb B C, Tellez A, O’Brien M (2019) Histology Strategies for Medical Implants and Interventional Device Studies Toxicologic Pathology Vol. 47(3) 235-249 

  11. Neuerburg C, Mittlmeier L M, Keppler A M, Westphal I, Glass ?, Saller M M, Herlyn P K E, Richter H, B?cker W, Schieker M, Aszodi A, Fischer D C (2019) Growth factor-mediated augmentation of long bones: evaluation of a BMP-7 loaded thermoresponsive hydrogel in a murine femoral intramedullary injection model. Journal of Orthopaedic Surgery and Research 14 297 

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  15. Albers J, Markus MA, Alves F, Dullin C (2018) X-ray based virtual histology allows guided sectioning of heavy ion stained murine lungs for histological analysis. Scientific Reports 8(1) 7712

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  41. Menne P (2007) Microtomy with Femtosecond Lasers. Biophotonics International; Laurin Publishing Co. Inc. May 2007 35 – 37

  用戶(hù)單位

中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院

University of Iowa Carver College of Medicine

HAWK University of Applied Sciences and Arts

German Heart Centre of the Technical University Munich

Georgia Institute of Technology, School of Chemistry and Biochemistry

Rostock University Medical Center, Department of Ophthalmology-1,-2

Rostock University Medical Center, Experimental Pediatrics Group-3

Queen Mary University of London

University of Gothenburg, BIOMATCELL VINN Excellence Center of Biomaterials and Cell Therapy-1

University of Gothenburg, Department of Clinical Chemistry and Transfusion-2

alizée pathology, LLC (now: StageBio)

Ratliff Histology Consultants, LLC

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