微柱液相色譜儀技術(shù)經(jīng)歷了數(shù)十年的發(fā)展，從早期的使用不銹鋼管的微孔填充柱，發(fā)展到使用熔融硅膠毛細(xì)管的毛細(xì)管填充柱。進(jìn)入20世紀(jì)80年代后期，隨著生命科學(xué)研究、臨床醫(yī)學(xué)研究、新型藥物研制、生物工程技術(shù)的發(fā)展、對產(chǎn)品質(zhì)量控制和環(huán)境監(jiān)測指標(biāo)的升級，提供了大量組成復(fù)雜樣品的分析任務(wù)。
為此必須提供具有高效分離能力和高靈敏度檢測能力的全新分析方法，并用于微量和痕量組分的分離和檢測。
納米(標(biāo)度)液相色譜技術(shù)和超高壓液相色譜技術(shù)正是適應(yīng)上述分析要求，先后于20世紀(jì)80年代末期和90年代初期先后提出。他們突破了常規(guī)液相色譜儀理論的約束，采用粒徑約為1.0μm的粒子填充色譜柱。在實驗裝置上采用當(dāng)代的最新技術(shù)，用微流路處理器提供納升數(shù)量級微小、穩(wěn)定的流動相流量，用微芯片制作技術(shù)在硅晶片上蝕刻出納米尺寸的色譜柱管，制造了填充壓力高達(dá)410MPa(60000psi)的高壓輸液泵和耐壓1030MPa(150000psi)的高壓進(jìn)樣閥，實現(xiàn)了前人從未實踐過的毛細(xì)管液相色譜分離技術(shù)。創(chuàng)建了理論塔板數(shù)高至20~40萬塊/m的高柱效，完成了組成復(fù)雜生物樣品的分離，還實現(xiàn)了與MS的聯(lián)用。從這些新技術(shù)的進(jìn)展，可充分看到色譜工作者的創(chuàng)造能力。
用于微柱液相色譜儀分析的高壓輸液泵，其輸出流量應(yīng)當(dāng)準(zhǔn)確，并有良好的重復(fù)性。由于輸出流量較小，早期曾使用氣動放大泵和螺桿注射泵，后經(jīng)改造常規(guī)往復(fù)式柱塞泵，使其也可輸出低流量流動相。
現(xiàn)多采用小型螺桿注射泵和往復(fù)式柱塞泵。往復(fù)式柱塞泵由于螺桿注射泵，它具有對大的柱反壓的補(bǔ)償能力，快的流路平衡和穩(wěn)定性，并可用于梯度洗脫。由于液流的混合有一定的困難，在低流速下柱加壓是一個耗費(fèi)時間的過程，若在梯度洗脫中使用螺桿注射泵，會明顯的增加梯度延遲。
當(dāng)對微柱進(jìn)行二元、三元、四元梯度洗脫時，使用低壓梯度仍是最經(jīng)濟(jì)的方法，此時應(yīng)使用精密時間比例電磁閥。此閥能準(zhǔn)確控制每種溶劑的比例，確保不存在滲漏和粘結(jié)，使每種低流量溶劑在小體積混合器中徹底混合。當(dāng)使用高壓梯度洗脫時也必須使用小體積的混合器，為保證高的混合效率，混合器也可使用一個很小的填充柱。對內(nèi)徑1.0mm、長200~300mm的微柱，其柱體積約為100~150μL;對內(nèi)徑0.5mm、長250mm的微柱，其柱體積已小至30μL。我們由此可知，微柱液相色譜儀梯度洗脫中所用混合器的體積要遠(yuǎn)小于柱體積，并要具有很高的混合效率，這在儀器制作商的難度很大。當(dāng)然，由于液相色譜儀廠家的技術(shù)和各方面服務(wù)是不盡相同的，要想儀器質(zhì)量最優(yōu)、使用壽命達(dá)到最長，那么選擇一家比較專業(yè)的廠家是異常重要的。
