Feulgen染色是經(jīng)典顯示去氧核糖核酸的方法，DNA定量測(cè)定的主要染色方法之一。
反應(yīng)原理
標(biāo)本經(jīng)稀鹽酸水解后，DNA分子中的嘌呤堿基被解離，從而在核糖的一端出現(xiàn)了醛基。Schiff試劑中的無(wú)色品紅可與醛基反應(yīng)，形成含有醌基的化合物分子, 因醌基為發(fā)色團(tuán)，故可呈現(xiàn)出紫紅色。也就是說(shuō), DNA經(jīng)稀酸水解后產(chǎn)生的醛基，具有還原作用，可與無(wú)色品紅結(jié)合形成紫紅色化合物，從而顯示出DNA的分布。
反應(yīng)方程式
2HCl Na2S2O5→2NaCl SO2 H2SO3
DNA是主要的遺傳物質(zhì)，集中于染色體上。1924年孚爾根首先用席夫試劑(Schiff)作試驗(yàn)，鑒定了染色體上DNA的存在，故稱為孚爾根染色法。孚爾根染色法的反應(yīng)原理主要與席夫試劑的化學(xué)性質(zhì)有關(guān)，此試劑的基本成分是堿性品紅，偏亞硫酸氫鈉(NaHSO3)和鹽酸.堿性品紅的主要成分是三氨基三苯甲烷氯化物。上海創(chuàng)賽科技提供亞硫酸氫鈉(AR)，Sodium bisulfate，7631-90-5，商品編號(hào)：C84-2756-500G，價(jià)格76元。
堿性品紅原為桃紅色，當(dāng)與亞硫酸作用時(shí)被氧化，使醌型變?yōu)楸叫?，由桃紅色變?yōu)闊o(wú)色透明的N-亞磺酸亞硫酸副品紅堿，當(dāng)它與醛基作用時(shí)，其分子式又恢復(fù)為醌型結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)紫紅色。上海創(chuàng)賽科技提供堿性品紅，AR，632-99-5，商品編號(hào)：D16-1009943-25g，價(jià)格29元。
利用1M HCl 、60℃下水解時(shí)，可將DNA分子中嘌呤堿基與去氧核糖之間的糖苷鍵打斷，使嘌呤脫下，并使去氧核糖C-1位置釋放醛基與席夫試劑反應(yīng)顯紫紅色。細(xì)胞中只有DNA才具有這種專一的孚爾根反應(yīng)，因此利用孚爾根反應(yīng)，可以鑒定DNA的存在。并廣泛應(yīng)用于核及染色體的研究中。
實(shí)驗(yàn)注意
固定劑中，以O(shè)sO4和Carnoy效果較好，OsO4(1%或0.5%)是Feulgen反應(yīng)的理想固定劑，只是因OsO4價(jià)錢較貴，故一般多采用Carnoy固定液。在Feulgen反應(yīng)中，不能單獨(dú)使用Bouin定液，因?yàn)樗荈eulgen反應(yīng)的最壞固定劑，但經(jīng)Aller改進(jìn)后的Bouin-Aller固定液效果卻較好。上海創(chuàng)賽科技提供乙醇胺(色譜固定液,30℃)，Ethanolamine，141-43-5，商品編號(hào)：C84-103805-100ml，價(jià)格170.5元。
Feulgen反應(yīng)通常用稀酸進(jìn)行水解，但水解的時(shí)間一定要適當(dāng)。如水解時(shí)間不夠, 反應(yīng)就會(huì)變?nèi)?如水解時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或水解地過(guò)于劇烈，則脫氧核糖也易掉下來(lái)，反應(yīng)也會(huì)減弱。適當(dāng)?shù)乃鈺r(shí)間一般為8~12min。但是水解時(shí)間長(zhǎng)短也要視標(biāo)本的類型(如厚薄等)、固定劑的性質(zhì)以及酸的濃度而定。
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