小 M 敲黑板??！朋友們，是不是忘了年前我們分享的實(shí)驗(yàn)寶典了！不都告訴你們細(xì)胞轉(zhuǎn)染的一大法寶了嗎！趕緊搬好小板凳跟著我一起復(fù)習(xí)一下。

　　細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中較為基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)，主要指將 DNA/RNA 導(dǎo)入真核細(xì)胞。細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法五花八門(mén)，常見(jiàn)的可分為化學(xué)法、物理法和病毒法。

　　先前小 M 已經(jīng)介紹過(guò)各種轉(zhuǎn)染方法的優(yōu)缺點(diǎn)了 (見(jiàn) “**心法” 有三式~)，在傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染方法 (如磷酸鈣法、電穿孔法、病毒法等) 轉(zhuǎn)染效率低、細(xì)胞毒性大、重復(fù)性差的情況下，以 Lipo3000 為主的陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑脫穎而出，一度成為轉(zhuǎn)染界的“熱門(mén)選手”。但是它貴啊！稍一不慎，人財(cái)兩空，哦不，是細(xì)胞和試劑都沒(méi)了，豈是一個(gè)慘字了得。

圖 1. 常見(jiàn)轉(zhuǎn)染技術(shù)原理

　　想要高效又價(jià)美的轉(zhuǎn)染試劑嗎？

MCE 重磅推出的性?xún)r(jià)比之王PolyFast Transfection Reagent(HY-K1014)，宿主范圍廣、轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小，最最最關(guān)鍵的是價(jià)格只有 Lipo3000 五分之一?。。ipo3000 五分之一?。?！Lipo3000 五分之一?。?！嘿嘿，重要的事情說(shuō)三遍。

圖 2. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟

　　小白: PolyFast Transfection Reagent 也是屬于陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑嗎？

　　小M: 不是哦！PolyFast Transfection Reagent 屬于陽(yáng)離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑，在確保高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)，對(duì)細(xì)胞毒性更?。?/span>

　　小白: 那可以使用有血清的培養(yǎng)基嗎？

　　小M: 可以使用有血清的培養(yǎng)基。但對(duì)于一些難轉(zhuǎn)染細(xì)胞，建議剛開(kāi)始轉(zhuǎn)染前使用無(wú)血清培養(yǎng)基，至少轉(zhuǎn)染一小時(shí)后再換成有血清培養(yǎng)基。

　　小白: 那培養(yǎng)基中含有抗生素會(huì)對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染有影響嗎？

　　小M: 可添加抗生素。但是為了提高轉(zhuǎn)染效率，建議剛開(kāi)始轉(zhuǎn)染前使用無(wú)抗生素培養(yǎng)基，后續(xù)可根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)體系添加相應(yīng)抗生素。

　　小白: 那在具體的操作過(guò)程中，DNA 和 PolyFast Transfection Reagent 的比例是多少呢？

　　小M: 我們推薦的 DNA (μg) 和 PolyFast Transfection Reagent (μL) 的用量比例為 1:3。如有必要，可在 1:1-1:5的范圍內(nèi)調(diào)整以?xún)?yōu)化轉(zhuǎn)染效果。最佳轉(zhuǎn)染條件因不同的細(xì)胞類(lèi)型和培養(yǎng)條件而有所區(qū)別，轉(zhuǎn)染前，可做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索最佳轉(zhuǎn)染比例。

　　小M: 此外，除了轉(zhuǎn)染質(zhì)粒 DNA，我們的轉(zhuǎn)染試劑也適用于 RNA 轉(zhuǎn)染~

　　小白: 那可以同時(shí)轉(zhuǎn)染兩個(gè)質(zhì)粒嗎？

　　小M: 當(dāng)然也可以啦！共轉(zhuǎn)的話，建議總 DNA 及 PolyFast Transfection Reagent 的用量同步提高兩倍，再根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)結(jié)果摸索兩個(gè)質(zhì)粒的使用比例。

　　小M: 就是如此優(yōu)秀，小 M 帶大家一起來(lái)看下我們的測(cè)試數(shù)據(jù)吧。

宿主范圍廣

　　MCE PolyFast Transfection Reagent 對(duì)多種常見(jiàn)細(xì)胞具有高水平轉(zhuǎn)染效率，也可轉(zhuǎn)染一些原代細(xì)胞和難轉(zhuǎn)染細(xì)胞。

　　下表列舉了本產(chǎn)品適用的部分細(xì)胞系。

圖 3. 適用細(xì)胞系

轉(zhuǎn)染效率高

圖 4. HEK293 細(xì)胞中和 BHK-21 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染效率比較

細(xì)胞毒性小

圖 5. 轉(zhuǎn)染效率比較和細(xì)胞活力測(cè)定

左：293 T 細(xì)胞，pcDNA3-C-REP 質(zhì)粒 (2.5 μg)；PolyFast Transfection Reagent (7.5 μL)；右：Huh-7 細(xì)胞活力測(cè)定

看了這么多，是不是心動(dòng)啦？有了 MCE PolyFast Transfection Reagent，老板再也不用擔(dān)心我做不好細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)啦！

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