【基本原理】
瓊脂糖凝膠電泳是分離、純化、鑒定DNA片段的常用方法，具有簡便、快速的優(yōu)點(diǎn)。DNA瓊脂糖凝膠電泳的原理與蛋白質(zhì)的電泳原理基本相同，DNA分子在高于其等電點(diǎn)的溶液中帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。DNA 分子在電場(chǎng)中通過介質(zhì)而泳動(dòng)，除電荷效應(yīng)外，凝膠介質(zhì)還有分子篩效應(yīng)，與分子大小及構(gòu)象有關(guān)。對(duì)于線性DNA 分子，其電場(chǎng)中的遷移率與其分子量的對(duì)數(shù)值成反比。在凝膠中加入少量溴化乙錠，其分子可插入DNA的堿基之間，因此可在紫外燈下直接觀察到DNA片段在凝膠上的位置，并可在紫外燈下或經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)觀察或拍照。
【器材】
1.水平電泳槽
2.電泳儀
3.紫外燈或凝膠成像儀
【試劑】
1.1%瓊脂糖
2.電泳緩沖液(1×TAE)
3.10mg/ml EB
4.電泳樣品上樣緩沖液：0.25%溴酚藍(lán), 0.25%二甲苯腈FF, 40%(W/V)蔗糖水溶液4℃保存。
【操作步驟】
1.稱0.2g瓊脂糖，加20ml電泳緩沖液(1×TAE)加熱熔化。
2.膠液冷至60℃時(shí)，加EB 20μl，小心混勻，緩慢倒入制膠模具中，在膠一端插上梳子。
3.待膠凝固后，撥出梳子，將模具置于電泳槽中，加入1×TAE，讓液面高于膠面1mm。
4.在DNA樣品中加入1:5的上樣緩沖液，上樣。
5.接通電源，1-5V/cm電壓，開始電泳。
6.據(jù)指示劑遷移位置，判斷是否終止電泳。切斷電源后，取出凝膠，紫外燈下或經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)觀察或拍照。
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