【基本原理】

　　Southern blot 是將電泳分離的DNA片段轉(zhuǎn)移到一定的固相支持物上的過程。DNA分子用限制性內(nèi)切酶酶切后，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳將所得的DNA片段按分子量大小分離，然后將含DNA 片段的瓊脂糖凝膠變性，將變性的單鏈DNA經(jīng)虹吸作用轉(zhuǎn)移并固定于固相支持膜上。轉(zhuǎn)移過程中，膜上DNA片段的相對位置保持不變。用標(biāo)記的DNA 或RNA探針與靶DNA雜交,洗去多余探針, 經(jīng)放射性自顯影或顯色反應(yīng)確定同源靶序列在膜上的位置和豐度。

　　【器材】

　　1.硝酸纖維素膜或尼龍膜

　　2.烤箱

　　3.封口機(jī)等其他實驗室常規(guī)儀器。

　　【試劑】

　　1.限制性核酸內(nèi)切酶

　　2.變性液： 5mol/L NaOH 4ml (0.2mol/L)1mmol/L Tris-Cl(pH7. 6) 15ml (0.15mol/L)

　　3.中和液：lmol/L Tris-Cl(pH7.6) 10ml (0.1mol/L)

　　5mol/L NaCl 3ml

　　ddH2O 定容100ml

　　4.轉(zhuǎn)移液(20×SSC)：3mol /L NaCl 、0.3mol/L 檸檬酸鈉，pH7.0

　　5.平衡緩沖液： 1 mol/L Tris-Cl (pH9.5) 10ml (0.1mol/L)

　　5 mol/L NaCl 2ml (0.1mol/L )

　　1 mol/L MgCl2 5ml (50mmol/L )

　　6.預(yù)雜交液： 20×SSC 25 ml(5×)

　　10%SDS 0.2 ml(0.02%)

　　10%十二烷基肌酸鈉1 ml(0.1%)

　　鮭精DNA 1g (1×)

　　中和液20 ml

　　ddH2O 定容100ml

　　7.雜交液(臨用前配制)：

　　預(yù)雜交液50 ml

　　變性探針50μl

　　8.顯色液：

　　NBT 135μl

　　BCIP 105μl

　　(上海創(chuàng)賽科技提供6578-06-9，對甲苯胺藍(lán)(BCIP)，≥99.0%，商品編號：D23-RS1075-100mg，價格384元。)

　　平衡緩沖液30 ml

　　9.抗地高辛標(biāo)記酶聯(lián)抗體(抗體-Dig-Ap)

　　上海創(chuàng)賽科技性能卓越，白介素細(xì)胞因子，胎牛血清，電泳設(shè)備科學(xué)儀器，原料藥標(biāo)準(zhǔn)品，化學(xué)試劑，細(xì)胞培養(yǎng)耗材，上海創(chuàng)賽，海量產(chǎn)品特價促銷中，歡迎來電咨詢!