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共 302 條

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感受態(tài)細菌的制備（化學法）

【基本原理】重組DNA分子需導入合適的宿主細胞(真核或原核細胞)才能進行復制，增殖和表達。用于分子克隆技術中的受體細胞為大腸桿菌K-12的衍生菌(DH5等)。細菌處于易于吸收外源DNA的狀態(tài)叫感受態(tài)...

2017-02-27 圍觀919次 [方案] 高教職教

瓊脂糖凝膠電泳

【基本原理】瓊脂糖凝膠電泳是分離、純化、鑒定DNA片段的常用方法，具有簡便、快速的優(yōu)點。DNA瓊脂糖凝膠電泳的原理與蛋白質的電泳原理基本相同，DNA分子在高于其等電點的溶液中帶負電荷，在電場...

2017-02-23 圍觀753次 [方案] 高教職教

DNA 與RNA 含量測定

【基本原理】核酸分子中含有堿基使核酸在260nm下有最大吸收。紫外吸收是嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)的共軛雙鍵系統(tǒng)所具有的性質，含有嘌呤和嘧啶的物質，不論是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。蛋白...

2017-02-22 圍觀833次 [方案] 高教職教

人外周血白細胞DNA的制備

【基本原理】從全血中制備白細胞DNA，可用水直接破裂血中紅細胞和白細胞的細胞膜及核膜，釋出血紅蛋白、細胞核;再用KI裂解細胞核并溶解DNA;最后用酚/氯仿除去蛋白質，加無水乙醇使DNA沉淀，經A2...

2017-02-21 圍觀740次 [維修] 高教職教

組織中基因組DNA 的制備

【基本原理】真核生物的DNA主要存在于細胞核內，以雙鏈線性高分子形式存在。DNA提取的主要過程是：破碎組織和細胞，去除與核酸結合的蛋白質及其它多糖、脂類等生物大分子，本實驗通過蛋白酶K和S...

2017-02-20 圍觀576次 [維修] 高教職教

蛋白質印跡免疫分析操作步驟

(一)轉移印跡1.轉移前準備：將濾紙，硝酸纖維素膜(NC)剪成與膠同樣大小，NC膜浸入蒸餾水中10-20min后浸入轉移buffer中平衡30min。2.凝膠平衡：將電泳后的SDS-PAGE膠板置于轉移buffer中平衡30-60...

2017-02-10 圍觀973次 [維修] 高教職教

蛋白質印跡免疫分析（Western Blot Anglysis）

【基本原理】蛋白質印跡免疫分析的過程包括蛋白質經凝膠電泳分離后，在電場作用下將凝膠上的蛋白質條帶轉移到硝酸纖維素膜上，經封閉后再用抗待檢蛋白質的抗體作為探針與之結合，經洗滌后，再將...

2017-02-09 圍觀676次 [方案] 高教職教

SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）操作步驟

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)操作步驟1.按圖安裝玻璃板2.按表制備分離膠(10%)，將分離膠混勻后立即灌注于玻板間隙中，上層小心覆蓋一層乙醇，將膠板垂直放于室溫下，待分離膠聚合完全后，傾去上...

2017-02-08 圍觀3785次 [維修] 高教職教

SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）

【基本原理】一個混合蛋白質樣品經過聚丙烯酰胺凝膠電泳以后，各組分由于電泳遷移率不同而被分離。這種差異就蛋白質分子本身而言主要與分子量以及所帶凈電荷和形狀有關。當電泳體系中含有一定濃...

2017-02-07 圍觀1161次 [方案] 高教職教

蛋白質比色定量法

【基本原理】游離狀態(tài)的考馬斯亮藍G250在酸性溶液中呈紅褐色，與蛋白質結合后呈藍色，蛋白質含量與顏色的深淺成正比，經595nm測定，可作出蛋白質含量與吸光度值的標準曲線，并求出未知樣品的蛋白...

2017-02-06 圍觀630次 [維修] 高教職教

血清γ-球蛋白的提取與純化

【基本原理】在蛋白質溶液中加入中性鹽至一定濃度時,蛋白質會沉淀析出，這種作用稱為鹽析，其機制與下列因素有關：蛋白質分子表面水化層被破壞;蛋白質分子所帶電荷被中和。鹽析沉淀的蛋白質，其...

2017-02-04 圍觀1768次 [原理] 高教職教

化妝品中亞芐基樟腦磺酸檢測方法

化妝品中亞芐基樟腦磺酸檢測方法1、適用范圍本方法介紹了采用高效液相色譜-紫外法測定化妝品中亞芐基樟腦磺酸(perfemikerC13-58079)的方法。暫無實驗數據表明本方式適用于粉類、蠟質類化妝品。2...

2017-01-13 圍觀792次 [維修] 高教職教

重組DNA技術（分子克隆）技術方案

DNA又稱基因工程(GeneticEngineering)。這項技術是在體外按照一定的目的和方案對DNA分子進行人工操作，將同一來源或異源的基因進行重組，然后把它們引入適當受體細胞中，隨著該細胞的繁殖，DNA重...

2017-01-11 圍觀2085次 [技術] 高教職教

基因表達的調控

基因表達的調控DNA儲存著細胞和生物體的所有信息，但在不同組織、不同的發(fā)育階段，這些細胞是有著很大差異的，這些差異源于某些基因的表達與否及表達量上的差異?；虮磉_的調控可在轉錄水平和翻...

2017-01-10 圍觀561次 [維修] 高教職教

基因表達和遺傳密碼

DNA能夠自主復制、永久存在的性質決定了其作為遺傳信息載體的使命，其分子上以核苷酸序列為存在形式的遺傳信息還要通過基因表達才能體現(xiàn)?；虮磉_是指遺傳信息通過轉錄和翻譯生成具有特定生物學...

2017-01-09 圍觀698次 [維修] 高教職教

DNA復制的引物、酶類和蛋白質因子

1.RNA引物DNA聚合酶只能從3端延長已經存在的DNA或RNA鏈開始合成，而不能從頭合成一條DNA鏈，因此，復制起始必須有一條RNA引物。通常RNA引物的長度是4～12個核苷酸，由引發(fā)酶催化合成。2.DNA聚合...

2017-01-06 圍觀1212次 [應用] 高教職教

DNA復制、損傷與修復

在細胞分裂過程中，親代細胞所含的遺傳信息完整地傳遞到兩個子代細胞，其中的DNA在傳代時完整地復制成兩份，這個過程稱為DNA復制。復制是嚴格按照A與T配對和G與C配對的規(guī)律進行的，通常有高度的...

2017-01-04 圍觀588次 [維修] 高教職教

分子生物學基本理論

分子生物學基本理論一、核酸是遺傳物質核酸是遺傳物質。核酸被分為核糖核酸(RNA)和脫氧核糖核酸(DNA)。DNA是一種由四種單核苷酸組成的高分子單鏈化合物，并由兩條單鏈嚴格按A與T配對和G與C配對的...

2017-01-03 圍觀1033次 [原理] 高教職教

梯度離心技術

梯度離心是待分離的物質在具有密度梯度的介質中進行的離心。梯度離心可分為兩種，即密度梯度離心(又稱沉降速度離心、速度區(qū)帶離心或差速區(qū)帶離心)和平衡密度梯度離心(等密度梯度離心和沉降平衡離...

2017-01-03 圍觀1164次 [原理] 高教職教

離心技術的應用

根據應用目的不同，離心機有分析用和制備用兩種。分析用超速離心機僅能對小樣品(小于1ml)進行分析(如分子量的測量);制備用離心機是為提取、純化大分子組分設計的，可對10~2000ml的樣品進行分離。...

2016-12-29 圍觀852次 [應用] 高教職教

離心技術的基本原理

基本原理物體圍繞中心軸旋轉時會受到離心力F的作用。當物體的質量為M、體積為V、密度為D、旋轉半徑為r、角速度為(弧度數/秒)時，可得：F=M2r或者F=VD2r上述表明：被離心物質所受到的離心力與該物...

2016-12-28 圍觀496次 [原理] 高教職教

高效毛細管電泳類型及應用

(1)毛細管區(qū)帶電泳毛細管區(qū)帶電泳法(CapillaryZoneElectrophoresis，CZE)的分離是基于組分淌度的區(qū)別。一般毛細管內壁帶負電荷，電滲流從陽極移動至陰極，流出順序是陰離子中性分子陽離子。若毛...

2016-12-26 圍觀758次 [維修] 高教職教

高效毛細管電泳的基本原理

高效毛細管電泳(HighPerformanceCapillaryElectrophoresis，HPCE)和一般電泳法的區(qū)別在于使用毛細管柱。在熔融石英毛細管內壁覆蓋一層硅氧基(Si-O)陰離子，由于吸引了溶液中的陽離子，由此在毛細...

2016-12-23 圍觀1575次 [原理] 高教職教

聚丙烯酰胺凝膠電泳

1、聚丙烯酰胺的合成和結構聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(Acrylamide簡寫為Acr)和交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺(N，N1-methylene-bisacrylamide，簡寫B(tài)is)在催化劑的作用下，聚合交聯(lián)成含有酰胺基側鏈的脂...

2016-12-22 圍觀1940次 [維修] 高教職教

電泳技術的種類

電泳技術的種類很多。根據有無固體支持物，可分為兩大類，即界面電泳和區(qū)帶電泳。界面電泳是指在溶液中進行的電泳，沒有固體支持物。當溶液中有幾種帶電粒子時，通電后，由于不同粒子泳動速度不...

2016-12-21 圍觀1089次 [原理] 高教職教

電泳技術Techniques in Electrophoresis

一、基本概念目前電泳技術已被廣泛應用于蛋白質、核酸和氨基酸等物質的分離和鑒定。何謂電泳?在溶液中，帶電粒子在外加電場的作用下，向相反電極方向移動的現(xiàn)象，稱為電泳。電泳時不同的帶電粒子...

2016-12-20 圍觀638次 [維修] 高教職教

親和層析原理(Affinity Chromatography)

親和層析法是近年來廣為重視并得到迅速發(fā)展的提純、分離方法之一。許多物質都具有和某化合物發(fā)生特異性可逆結合的特性。例如：酶與輔酶或酶與底物(產物或競爭性抑制劑等)，抗原與抗體，凝集素與...

2016-12-19 圍觀1405次 [維修] 高教職教

凝膠過濾技術(Gel filtration technology)

凝膠過濾是利用具有一定口徑范圍的多孔凝膠的分子篩作用對生物大分子進行分離的層析技術。當樣品隨流動相經過由凝膠組成的固定相時，分子量大的物質不能擴散進入凝膠顆粒內部，于是隨流動相流經...

2016-12-16 圍觀1162次 [維修] 高教職教

離子交換層析基本操作方法

離子交換層析(Ion-exchangeChromatography)離子交換層析是利用離子交換劑對需要分離的各種離子具有不同的親和力(靜電引力)而達到分離目的的層析技術。離子交換層析的固定相是離子交換劑，流動相...

2016-12-14 圍觀4608次 [維修] 高教職教

分配層析原理 Distribution Chromatography

分配層析是利用混合物中各組分在兩相中分配系數不同而達到分離目的的層析技術，相當于一種連續(xù)性的溶劑抽提方法。在分配層析中，固定相是極性溶劑(例如水、稀硫酸、甲醇等)。此類溶劑能和多孔的...

2016-12-13 圍觀15310次 [原理] 高教職教

吸附層析技術的簡介及原理

層析技術是近代生物化學實驗中常用的分析方法。任何層析過程都是在兩個相中進行的。一是固定于支持物上的固定相，另一是流經固定相的流動相，由于樣品中各組分理化性質(如溶解度、吸附能力、分子...

2016-12-12 圍觀5650次 [原理] 高教職教

幾種常用的國產分光光度計

(一)721型分光光度計(圖2-5)這是一種采用光電管為受光器的較高級可見光分光光度計。由穩(wěn)壓電源供電的光源燈發(fā)出穩(wěn)定的白光。如圖2-5所示。光線經反射鏡投入狹縫，再經準直鏡反射進入棱鏡，在棱鏡...

2016-12-08 圍觀9656次 [維修] 高教職教

分光光度計的結構原理

不論光度計(Photometer)、比色計(Colorimeter)還是分光光度計(Spectrophotometer)，其基本結構原理都是相似的，都由光源、單色光器、狹縫、吸收杯和檢測器系統(tǒng)等部分組成(圖2-3)。(一)光源一個良...

2016-12-06 圍觀2189次 [原理] 高教職教

分光光度法Spectrophotometry基本原理

分光光度法Spectrophotometry基本原理光線是高速運動的光子流，也是具有波長和頻率特征的電磁波。光子的能量與頻率成正比，與波長成反比。肉眼可見的光線稱為可見光。可見光只占電磁波譜的很窄部...

2016-12-05 圍觀986次 [原理] 高教職教

生物大分子制備原理

一、透析和超濾(DialysisandUltrafiltration)1、透析是利用蛋白質等生物大分子不能透過半透膜而進行純化的一種方法。脫鹽透析是應用最廣泛的一種透析方法。將含鹽的生物大分子溶液裝入透析袋內,...

2016-12-01 圍觀854次 [原理] 高教職教

以蛋白質為例的分離純化實驗

鹽析(Saltingout)鹽析方法是蛋白質和酶提純工作中應用最早，至今仍廣泛應用的方法。其原理是蛋白質在高濃度的鹽溶液中，隨著鹽濃度的逐漸增加，蛋白質表面的電荷被中和，水化膜被破壞，蛋白質分...

2016-11-30 圍觀646次 [維修] 高教職教

生物大分子的基本制備技術

生物大分子的基本制備技術生物大分子的制備過程包括選材、細胞破碎和細胞器分離、生物大分子提取純化、以及樣品濃縮干燥和儲存等。生物大分子的制備是一項十分細致的工作，既要設法得到它們的純...

2016-11-29 圍觀559次 [維修] 高教職教

核酸的鑒定、保存與應用

(一)核酸的鑒定1.濃度鑒定核酸濃度的定量鑒定可通過紫外分光光度法與熒光光度法進行。(1)紫外分光光度法：紫外分光光度法是基于核酸分子成分中的堿基均具有一定的紫外線吸收特性，最大吸收波長在...

2016-11-28 圍觀1447次 [維修] 高教

核酸分離與純化的技術路線設計

(一)核酸的釋放正常情況下，無論是DNA還是RNA均位于細胞內，因此核酸分離與純化的第一步就是破碎細胞、釋放核酸。細胞的破碎方法非常多，包括機械法與非機械法兩大類。機械法又可分為液體剪切法...

2016-11-25 圍觀1190次 [維修] 高教職教

核酸分離與純化的設計與原則

細胞內的核酸包括DNA與RNA兩種分子，均與蛋白質結合成核蛋白(nucleoprotein)。DNA與蛋白質結合成脫氧核糖核蛋白(deoxyribonucleoprotein，DNP)，RNA與蛋白質結合成核糖核蛋白(ribonucleoprotein...

2016-11-24 圍觀571次 [原理] 高教職教

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